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X-Gal和IPTG的配制

發(fā)布時(shí)間:2020-1-17   瀏覽次數(shù):6514

IPTG,中文名稱異丙基-β-D-硫代半乳糖苷”,是一種作用極強(qiáng)的誘導(dǎo)劑, 常用于需要誘導(dǎo) β-半乳糖苷酶活性的克隆實(shí)驗(yàn)。

X-Gal ,中文名稱“5--4--3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷”,是β-半乳糖苷酶(β - galactosidase) 的底物,水解后呈藍(lán)色;谶@個(gè)特點(diǎn),pUC系列載體DNA (或其他帶有lacZ 基因載體DNA) lacZ缺失細(xì)胞為宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)、或用M13噬菌體載體DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí),如果在平板培養(yǎng)基中加入X-GalIPTG,由于β-半乳糖苷酶的α一互補(bǔ)性,可以根據(jù)是否呈現(xiàn)白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑選出基因重組體。

使用方法:

首先把X-Gal配制成20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF) 溶液(-20C避光保存),然后在100 ml的瓊脂培養(yǎng)基中,加入200 μl的上述溶液、100 μ lIPTG (24 mg/m) 100 μIAmp (100 mg/m), 制作成X-Gal、IPTG、Amp平板培養(yǎng)基。當(dāng)DNA片段插入至pUC系列載體(或其他帶有lacZ、Amp基因載體),然后轉(zhuǎn)化至lacZ缺失細(xì)胞中后,涂布上述的X- Gal、IPTGAmp平板培養(yǎng)基,可根據(jù)長(zhǎng)出菌體的藍(lán)白色,而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體。