X-gal（也縮寫(xiě)為BCIG，5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷）是一種有機(jī)化合物，由半乳糖與取代的吲哚連接而成。該化合物由杰羅姆·霍維茨及其合作者于1964年合成。

X-gal的用途

X-gal常用于分子生物學(xué)為了測(cè)試酶的存在，β-半乳糖苷酶取代了它通常的目標(biāo)β-半乳糖苷。它還被用來(lái)檢測(cè)這種酶的活性組織化學(xué)和細(xì)菌學(xué)。

X-gal是許多吲哚酚苷和酯中的一種，能產(chǎn)生不溶的藍(lán)色化合物，類似于靛藍(lán)染料作為酶催化水解的結(jié)果。^[2]

X-gal是乳糖的類似物，因此可能會(huì)被β-半乳糖苷酶分解β-淀粉酶的酶糖苷鍵在D-乳糖中。

當(dāng)X-gal被β-半乳糖苷酶裂解時(shí)，產(chǎn)生半乳糖和5-溴-4-氯-3-羥基吲哚- 1。后者隨后自發(fā)二聚并氧化成5，5’-二溴-4，4’-二氯-indigo- 2，一種不溶的深藍(lán)色產(chǎn)物。

X-gal本身是無(wú)色的，因此藍(lán)色產(chǎn)物的存在可用于檢測(cè)活性β-半乳糖苷酶的存在。這也允許細(xì)菌β-半乳糖苷酶(所謂的lacZ)被用在各種應(yīng)用中。^[3]

基因克隆中，X-gal被用作細(xì)胞是否表達(dá)功能性β-半乳糖苷酶一種叫做酶的技術(shù)藍(lán)色/白色篩選。這種篩選方法是區(qū)分成功克隆產(chǎn)品和其他不成功克隆產(chǎn)品的簡(jiǎn)便方法。

制備20 mg/ml X-gal儲(chǔ)備溶液的說(shuō)明如下：

1.稱取200毫克X-Gal，放入15毫升聚丙烯離心管中。

2.加入10毫升二甲基甲酰胺(DMF)。渦旋溶解X-Gal。

3.儲(chǔ)存在-20°c下。用鋁箔包裹離心管以避光。

注意:X-Gal溶液在6-12個(gè)月內(nèi)是穩(wěn)定的，除非處理不當(dāng)。如果經(jīng)常小規(guī)模使用X-Gal溶液，我們建議制備1 ml等分溶液，以最大限度地減少降解。

對(duì)于藍(lán)白篩選，如果您使用20 mg/ml儲(chǔ)備溶液，則每1 mL培養(yǎng)基使用10 l。如果您使用的是100毫克/毫升的儲(chǔ)備溶液，它只能穩(wěn)定一周，請(qǐng)使用2升。

X-Gal的儲(chǔ)存方法如下：

將粉末X-gal儲(chǔ)存在-20°c，避光保存。

將X-gal儲(chǔ)備溶液儲(chǔ)存在-20°c下。保護(hù)儲(chǔ)存的儲(chǔ)備溶液免受光照非常重要。你可以用鋁箔把管子包起來(lái)。