Hoechst33258 熒光染色法【試劑盒不同，固定染色時間不同�！�

①人肝癌細胞HepG2經(jīng)常規(guī)傳代培養(yǎng)至對數(shù)期，棄去舊培養(yǎng)液，用0.25％胰蛋白酶溶液消化后制成單細胞懸液，調(diào)整細胞密度為1× 10⁶ /ml，接種于6孔培養(yǎng)板中。置于37°C、5％CO2 恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，觀察細胞貼壁情況。

②待貼壁細胞密度達到80％后，棄去培養(yǎng)液，用PBS小心沖洗細胞兩遍，加入不同濃度的人參皂苷轉(zhuǎn)化物溶液200μl，繼續(xù)培養(yǎng)24h。

③24h后消化收集細胞，1000r/min離心5min，棄去上清液；用PBS重懸細胞，1000r/min離心洗滌2 次；

④第二次離心洗滌后留少許上清，用微量加樣器吸取細胞在潔凈載玻片上涂片，室溫自然干燥；隨即使用甲醇∶冰醋酸(3∶1)固定液固定15 min；

⑤晾干后于暗處用Hoechst 33258 染色工作液(10mg/l)避光染色10 min后用雙蒸水沖洗5min，抗淬滅封片液封片；

⑥置于激光共聚焦顯微鏡下，激發(fā)波長350nm，發(fā)射波長460nm，觀察細胞凋亡情況并拍照。

①人肝癌細胞HepG2經(jīng)常規(guī)傳代培養(yǎng)至對數(shù)期，棄去舊培養(yǎng)液，用0.25％胰蛋白酶溶液消化后制成單細胞懸液，調(diào)整細胞密度為5× 10⁵ /ml，接種于6孔培養(yǎng)板中。置于37℃、5％CO2 恒溫細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，觀察細胞貼壁情況。

②待貼壁細胞密度達到80％后，棄去培養(yǎng)液，用PBS小心沖洗細胞兩遍，一孔加入含10％胎牛血清的完全培養(yǎng)液，其余各孔分別加入高、中、低3個濃度的人參皂苷轉(zhuǎn)化物溶液與順鉑溶液200μl，繼續(xù)培養(yǎng)48h。

③倒置顯微鏡下觀察各組細胞生長情況和形態(tài)變化。