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發(fā)布時間：2021-8-10 瀏覽次數(shù)：2529
甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)測定的臨床意義
早在1966年，Hopsu-Havu和Glenner等在鼠的肝、腎組織中發(fā)現(xiàn)了一種新的二肽氨基肽酶。這種酶能水解甘氨酰-脯氨酰-B-萘胺，釋放二肽甘氨酰脯氨酸，而被稱為甘氨酰脯氨酸-B-萘胺酸〔1〕。由于甘氨酰脯氨酰-B-萘胺有致癌作用，Nagatsu等合成了新底物甘氨酰脯氨酰對硝基苯胺〔2〕，并為大家廣泛接受，這種酶也一度被稱為甘氨酰脯氨酸對硝基苯胺酶，現(xiàn)已通稱為甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(Glycyl proline dipeptidyl aminopeptidase,GPDA)。
GPDA分布于肝、腎、結締組織、唾液腺和血清、唾液等體液中，但其生理功能尚不清楚。由于GPDA能特異地水解釋放肽鏈N-末端的甘氨酰-脯氨酸(Gly-Pro)，而膠原分子中富含有這種Gly-Pro結構，提GPDA的生理作用可能與膠原肽降解有關。
七十年代，血清GPDA測定被逐漸引入到臨床應用。
一、血清GPDA對肝癌鑒別診斷的價值
在若干學者發(fā)現(xiàn)肝膽疾病病人血清GPDA升高之后，Kojima等首先報道了原發(fā)性肝癌(PHC)病人血清GPDA活性(198±110.4U/L,n=53)不僅顯著高于健康對照組(77.5±17.1U/L,n=100)，
而且顯著高于慢性肝炎，肝硬變和其他膽道疾病(如膽石癥、阻賽性黃疸等)病例組〔3〕。部分肝癌病人的血清GPDA超過200U/L，而20例超過200U/L的病例中，除一例總膽管結石外，其余都是肝癌。
綜合國內(nèi)外文獻報道，原發(fā)性肝癌病人血清GPDA約為健康人的1.5～2.5倍〔3～7〕；陽性率在57～100％不等。原發(fā)性肝癌病人血清GPDA水平與轉移性肝癌病人無顯著差異〔3〕。但Hutchinson等報道，轉移性肝癌病人血清GPDA高達健康對照的3.3倍，陽性87.5％(14/16)；其中一例67歲老年女病人在血清GPDA升高一周后，血清轉氨酶活性才出現(xiàn)高，提示血清GPDA對早期發(fā)現(xiàn)肝細胞損傷，可能比轉氨酶更加敏感。
原發(fā)性肝癌病人血清GPDA活性與AFP水平不相關〔3，9〕。對178例原發(fā)性肝癌病人的檢查發(fā)現(xiàn)，AFP陽性131例(陽性率73.6％)，AFP陰性47例(陰性率26.4％)。而AFP陽性和陰性兩組病例的血清GPDA活性分別為82.60±3.33U/L和83.63±5.63U/L，升高的陽性率分別為63.4％和66.0％；把AFP陽性和陰性病例合并計算，血清GPDA活性為82.87±2.86U/L，升高的陽性率為64.0％；這些差異都不具有統(tǒng)計學意義。三例AFP陰性的亞臨床期原發(fā)性肝癌病人，有2例GPDA升高。提示血清GPDA與AFP有良好的互補作用。亞臨床期原發(fā)性肝癌病人的血清GPDA活性雖然顯著高于健康人(P＜0.01)，但其活性水平和陽性率均顯著低于臨床期病人，反映了血清GPDA水平與原發(fā)性肝癌的病情有關〔5〕。
用3 甲基-DAB誘導肝癌的大鼠，血清中GPDA活性大約也為健康鼠的2倍，而肝癌組織的勻漿和微粒體部分的GPDA比活性都顯著低于健康鼠者；而用肝癌組織制取的細胞液部分的GPDA比活性，顯著高于用正確肝組織制取者。說明肝癌時血清GPDA的升高，是由于微粒體內(nèi)酶向外釋放增多引起，與血清r-GT升高是由于合成增多而引起的機制不同〔4〕。
急性肝炎，慢活肝、肝硬變、阻塞性黃疸等，血清GPDA可有不同程度升高，但升高幅度不及肝癌病人。但是，重癥肝炎〔7〕、酒精性肝炎〔8〕時，血清GPDA升高幅度十分顯著，可超過肝癌病人。
與上述肝膽疾病時血清GPDA升高不同，十九例肝血管瘤病人，無一例血清GPDA超過正常值上限〔5〕。說明對影象學診斷“占位性病變”者，血清GPDA測定具有定性鑒別作用。如果血清GPDA升高可以排除血管瘤的診斷。
二、血清GPDA在胃癌診斷中的價值
幾乎在發(fā)現(xiàn)肝膽疾病病人血清GPDA升高的同時，發(fā)現(xiàn)胃癌病人血清GPDA明顯下降〔10，11〕。盡管下降機理迄今不明，但這種現(xiàn)象已為國內(nèi)外諸多報道證實。饒有趣味的是，用六種氨基酸合成六種X-脯胺酰對硝基苯胺(X=不同氨基酸)作底物，測定正常人和胃癌病人的血清GPDA，盡管不同底物測得的GPDA活性水平有十分明顯的差別，但每種底物各自測得的胃癌病人血清GPDA活性均值，都在正常人的一半左右〔11〕。近年若干報道采用較高濃度的底物，提高了GPDA活性的絕對值，但沒有改變正常人和胃癌病人血清GPDA活性均值的倍比關系。
其它良性胃腸道病變，血清GPDA也可略有下降〔12〕。下降幅度較大的為胃潰瘍，依次為慢性胃炎和十二指腸球部潰瘍。把低于正常對照組血清GPDA活性均值減去三個標準差，作為判別胃部良、惡性病變的臨界值，低于此值為陽性，則胃潰瘍、慢性胃炎和十二指腸球部潰瘍的陽性率依次為10.4％、6.2％和0；遠低于胃癌的陽性率(72.5％)。良性病變時血清GPDA活性下降，可否作為癌變的早期信號，尚有待進一步研究。但是對血清GPDA顯著下降者，應該警惕胃癌的可能。
肺癌、賁門癌和食管癌病人血清GPDA活性也有不同程度的下降，下降幅度依上述順序依次由大到小。如果胃癌和這些器官癌癥病人出現(xiàn)肝轉移時，GPDA活性可明顯升高。胃癌切除后，血清GPDA也有回升趨勢。
三、其他疾病時的血清GPDA水平
對類風濕關節(jié)炎(RA)病人血清GPDA活性的觀察發(fā)現(xiàn)，病程在15個月以上者，血清GPDA活性顯著低于健康對照(P＜0.05)，酶活性水平與病程長呈負相關(γ=-0.53,P＜0.05)，兩者之間的關系為Y(酶，U/L)=56.74-0.20X(病程，月)�？梢酝评�，諸如RA這種進行性疾病，病程愈長，接受有效治療愈多，病人的病情也愈重，疾病累及范圍愈大，血清GPDA也愈低。
系統(tǒng)性紅斑性狼瘡(SLE)病人血清GPDA也顯著低于健康對照(P＜0.01)，但酶活性與臨床表現(xiàn)不相關〔13〕。
RA和SLE病人血清GPDA活性下降，可能是由于長期炎癥，使結締組織明顯萎縮，導致全身總膠原減少引起。
急性淋巴細胞性白血病、淋巴肉瘤和何杰全氏病病人，血清GPDA顯著低于健康對照，而慢性粒細胞性白血病病人與健康人無顯著差〔14〕。
四、尿液中的GPDA
用熒光法測定人尿GPDA活性，發(fā)現(xiàn)同一健康人天內(nèi)天間GPDA活性水平很小變異，以每克肌酐相應的酶活性報告時尤為如此〔15〕。腎小球腎炎病人的尿GPDA(10.56±9.1U/L或17.44±19.8U/克肌酐)顯著高于健康對照(2.16±1.2U/L或4.30±1.7U/克肌酐)〔16〕。肌酐清除值(Ccr)較高者，尿GPDA較低，反之則較高。Ccr在1～30ml/min之間的病人，Ccr與尿GPDA活性略呈負相關(r=-0.567)。
將收集保存在4℃冰箱的正常人和腎小球腎炎病人的晨尿，超濾濃縮后，通過Sephadex G200柱層析，正常人尿GPDA主峰(峰Ⅰ)在靠近空容量處，分子量400000，其后緊隨一個很小的峰(峰Ⅰ)，分子量230000；而腎病病人尿GPDA的峰Ⅰ、峰Ⅱ位置雖與正常人相當，但峰Ⅰ為小峰，峰Ⅱ為大峰。而用正常人和病人的新鮮尿液，兩者的層析譜一致。正常人和病人尿GPDA的峰Ⅰ，對底物的Km值十分接近。腎病病人尿GPDA值峰Ⅱ的Km值略低于峰Ⅰ，與從人腎提純的GPDA的Km值接近。峰ⅠGPDA的分子量遠大于人血清GPDA分子量(220000)。以上結果提示，峰Ⅰ、峰Ⅱ的酶在分子特性、來源和進入尿液的機制存在著差異〔16〕。
把從人頜下腺提取的GPDA和腎病病人尿，分別加入到正常人尿中，GPDA的回收率為98±3.6％和95±2.2％，提示尿中不存在該酶的激活劑、抑制劑等干擾物質(zhì)，尿液毋須處理，可直接用于GPDA測定。
五、GPDA水平的生理變異
用臍帶血為樣品，測定血清GPDA活性，六十五例新生兒的血清GPDA顯著低于健康成人(23～76歲)〔14〕，說明從嬰兒出生到20歲的迅速發(fā)育價段，血清GPDA活性逐漸升高。這可能與膠原量的增加有關，也提示GPDA在膠原肽降解中的作用。
四十歲以下的青年男子的血清GPDA，略高于青年女子(P＜0.001)；四十歲以上女子的血清GPDA略高于40歲以下的青年女子(P＜0.05)，但男子不然〔11〕。
以每克肌酐表示尿GPDA活性，四十歲以上的女性組和男女混合計算組均顯著高于40歲以下的青年男、女組和男女混合計算組(P＜0.005)；如果不以年齡劃分，則女性顯著高于男性(P＜0.005)；一百六十二例健康人的尿GPDA活性呈明顯的正態(tài)分布〔15〕。
綜上所述，血、尿GPDA測定有著比較廣泛的臨床意義和應用前景。尤其是對原發(fā)性肝癌的診斷，對影象學診斷為“占位性病變”的定性鑒別，以及對胃癌的診斷和監(jiān)測胃癌等其他器官的肝轉移等，都是一項值得采用的試驗。由于原發(fā)性肝癌病人血清GPDA與AFP水平不相關，兩者具有良好的互補作用。
