D-熒光素使用中的常見(jiàn)問(wèn)題

D-熒光素適合做哪些實(shí)驗(yàn)?

D-熒光素鉀鹽和 5-氟-熒光素，作為 Luciferase的作用底物，常用于以下實(shí)驗(yàn)：

1. 報(bào)告基因分析

2. In vivo imaging (動(dòng)物活體成像)

3. In vitro imaging (細(xì)胞體外分析)

4. ATP 測(cè)定

5. 其它 luciferase 及其基因相關(guān)的分析和研究工作

D-熒光素鉀鹽溶液的穩(wěn)定性

D-熒光素鉀鹽易溶于水和緩沖液，溶解度可高達(dá) 25mg/mL。一般使用濃度為 3-15 mg/mL。

溶液的 pH 值、溶液中的氧氣和保存時(shí)間對(duì)其保存過(guò)程中的穩(wěn)定性非常重要。當(dāng)溶液的pH<6.5（發(fā)生水解作用）或>7.5（發(fā)生消旋化作用，D 型轉(zhuǎn)化為 L 型）的情況下，D-熒光

素鉀鹽相對(duì)不穩(wěn)定。如果溶液中存在少量的氧氣，將加速 D-熒光素鉀的降解速度。D-熒光素配成溶液后，在最佳的保存條件（-80°C，最佳 pH，無(wú)氧氣）下，存在固定的降解速度：0.2％/天，因此配成溶液保存的 D-熒光素應(yīng)盡量在 1 年內(nèi)使用完。有水存在的情況下，主要發(fā)生消旋化作用，即 D-熒光素轉(zhuǎn)化成 L-熒光素，有報(bào)道稱(chēng) L-熒光素對(duì)熒光素酶催化的酶促反應(yīng)有抑制作用。

D-熒光素、D-熒光素鈉和 D-熒光素鉀之間的區(qū)別

主要區(qū)別在于溶解和分散性能。D-熒光素鉀鹽在水和緩沖液中的溶解度高，且溶解速度

較快，故在一般的生物學(xué)試驗(yàn)中常用 D-熒光素鉀鹽。

D-熒光素鉀的保存和運(yùn)輸條件

保存條件：≤-20°C，避光，保持干燥。（在不打開(kāi)包裝的條件下，可保存兩年時(shí)間）。

運(yùn)輸條件：高純度的 D-熒光素鉀可在短時(shí)間內(nèi)常溫條件下保存，運(yùn)輸條件為常溫。原裝（沒(méi)有打開(kāi)包裝）熒光素的包裝瓶中充有氬氣，保證其穩(wěn)定性，打開(kāi)包裝后，請(qǐng)嚴(yán)格按照保存條件保存。D-熒光素鉀鹽具有易溶于水的特性，其暴露于空氣中，易吸潮。在稱(chēng)量過(guò)程中，請(qǐng)考慮其易吸潮的特性，先進(jìn)行溫度平衡，再快速稱(chēng)取。