免疫檢測(cè)標(biāo)志物超過(guò)100個(gè)

免疫檢測(cè)標(biāo)志物統(tǒng)計(jì)超過(guò)100個(gè)，按照免疫反應(yīng)中的角色，標(biāo)志物可以分為抗體與抗原，其中抗原又包括大分子抗原與小分子抗原。

二、化學(xué)發(fā)光的原理

▍免疫反應(yīng)

抗原進(jìn)入機(jī)體，刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)，使之產(chǎn)生免疫應(yīng)答，這種反應(yīng)叫免疫反應(yīng)。免疫反應(yīng)應(yīng)答包括對(duì)抗原物質(zhì)的感應(yīng)、反應(yīng)、效應(yīng)三個(gè)連續(xù)的階段。

▍免疫分析（immunoassay，IA）

在臨床檢驗(yàn)中，基于抗原與其配對(duì)抗體能夠發(fā)生特異反應(yīng)，用已知的抗原或抗體檢測(cè)分析體液中的抗體或抗原性物質(zhì)。

▍高特異性

抗原抗體的結(jié)合實(shí)質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。抗原抗體反應(yīng)的高特異性是免疫學(xué)檢測(cè)的基礎(chǔ)。

▍高親和性

抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過(guò)程是一種動(dòng)態(tài)平衡，其反應(yīng)式為：Ag+Ab→Ag·Ab。高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合，兩者結(jié)合牢固，不易解離。

三、免疫分析技術(shù)的發(fā)展：

美國(guó)臨床化學(xué)會(huì)議規(guī)定：凡是通過(guò)測(cè)量光子計(jì)數(shù)的方法都是化學(xué)發(fā)光。

與酶聯(lián)免疫相比化學(xué)發(fā)光的進(jìn)步點(diǎn)：

1.全程自動(dòng)化——機(jī)械與自動(dòng)化；

2.定量技術(shù)的優(yōu)化：利用化學(xué)發(fā)光發(fā)光，精確計(jì)算光子數(shù)——光學(xué)；

3.磁性顆粒的應(yīng)用——材料；

4.抗體標(biāo)記技術(shù)的進(jìn)步——生物化學(xué)。

四、免疫診斷五大方法對(duì)比：化學(xué)發(fā)光是趨勢(shì)

與其他免疫診斷方法相比，化學(xué)發(fā)光由于其在安全性、自動(dòng)化操作、測(cè)試準(zhǔn)確性、以及測(cè)試速度等方面的系統(tǒng)性優(yōu)勢(shì)，在性能上對(duì)其他技術(shù)形成全面超越，因此成為免疫診斷的主流。

▍化學(xué)發(fā)光步驟繁多

▍化學(xué)發(fā)光原理解析：以酶促法（一步法）為例

根據(jù)沖洗次數(shù)，可以分為一步法、兩步法、三步法等、四步法；

各個(gè)組分的量在5~200uL級(jí)別；

所有過(guò)程均需要在特定溫度中進(jìn)行；

樣本中與被檢測(cè)檢測(cè)抗原/抗體結(jié)構(gòu)類似的物質(zhì)會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生較大影響；

五、化學(xué)發(fā)光產(chǎn)品開(kāi)發(fā)流程多

▍化學(xué)發(fā)光試劑盒產(chǎn)品開(kāi)發(fā)流程：

▍▍建平臺(tái)

• 原理樣機(jī)、磁珠-抗體標(biāo)記平臺(tái)、酶-抗體標(biāo)記平臺(tái)、試劑開(kāi)發(fā)平臺(tái)、校準(zhǔn)質(zhì)控開(kāi)發(fā)平臺(tái)

▍▍買原料

• 潛在抗體（用于“磁珠”“酶標(biāo)”，10種以上）、潛在抗原（標(biāo)準(zhǔn)品）、其他生物化學(xué)品、被開(kāi)發(fā)項(xiàng)目對(duì)照試劑盒

▍▍標(biāo)記

• 潛在抗體與磁性顆粒制成“磁珠”母液

• 潛在抗體與酶標(biāo)記制成“酶標(biāo)”母液

▍▍原料初篩

• 將“磁珠”與“酶標(biāo)”進(jìn)行搭配，并嘗試合適的“配方”溶液對(duì)“磁珠”“酶標(biāo)”母液進(jìn)行稀釋；

• 調(diào)制其他的試劑盒組分（樣本處理液、稀釋液、校準(zhǔn)品等）；

• 在原理樣機(jī)中選取合適的測(cè)試流程，對(duì)各個(gè)組分組成的試劑盒進(jìn)行簡(jiǎn)單性能測(cè)試，選取2-3個(gè)抗體對(duì)；

▍▍全性能驗(yàn)證

• 對(duì)抗體對(duì)做全性能驗(yàn)證，選出合適的抗體對(duì)，并對(duì)配方進(jìn)行優(yōu)化

• 校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的開(kāi)發(fā)

六、化學(xué)發(fā)光產(chǎn)品開(kāi)發(fā)難度大

▍化學(xué)發(fā)光產(chǎn)品開(kāi)發(fā)難的根本原因在于標(biāo)志物的濃度低

• 根本原因在于被測(cè)物（抗原、抗體）在樣本中的濃度低，造成從研發(fā)、生產(chǎn)到使用需要更加精密、規(guī)范——生化診斷測(cè)試的糖類，脂肪類等在人體內(nèi)的含量普遍為g/L-μg/L水平，而免疫診斷的對(duì)象抗原、抗體等僅為μg/L—pg/L水平，兩者差別達(dá)到約106倍。

• 儀器與試劑封閉，對(duì)企業(yè)儀器與試劑的開(kāi)發(fā)能力要求都很高，儀器決定下限，試劑決定上限；

• 需要各個(gè)領(lǐng)域的前沿技術(shù)：機(jī)械自動(dòng)化、光學(xué)、材料、統(tǒng)計(jì)等，領(lǐng)域內(nèi)的人才明顯不足，培養(yǎng)難度大；

• 研發(fā)費(fèi)用高、周期長(zhǎng)。

▍化學(xué)發(fā)光儀器構(gòu)成復(fù)雜

全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀實(shí)現(xiàn)各步反應(yīng)的自動(dòng)化、溫度控制、結(jié)果輸出等。

▍磁分離技術(shù)得到應(yīng)用

▍磁微粒標(biāo)記-分離技術(shù)

• 磁微粒指的是nm級(jí)別的磁性顆粒，表面帶有活性基團(tuán)；

• 磁微�？梢岳�用表面的活性基團(tuán)與抗體、抗原、鏈霉親和素連接；

• 伴隨著磁微粒技術(shù)的發(fā)展，板式發(fā)光已近基本被淘汰。

▍磁微粒分離技術(shù)特點(diǎn)

• 較微孔板擴(kuò)大抗原抗體結(jié)合表面積，增加抗原或抗體的結(jié)合量，提高檢測(cè)靈敏度;

• 加快反應(yīng)速度，迅速捕獲抗原抗體;

• 易于結(jié)合相、游離相的分離，提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。

酶標(biāo)記技術(shù)、溯源以及試劑盒的開(kāi)發(fā)難點(diǎn)

▍酶標(biāo)記技術(shù)

• 抗體/抗原表面具有多個(gè)活化基團(tuán)（氨基/羧基），通過(guò)這些基團(tuán)連接酶與抗體稱為酶標(biāo)記；

• 酶標(biāo)記分為大分子與大分子標(biāo)記、大分子與小分子標(biāo)記；

• 交聯(lián)程度的小大對(duì)試劑盒性能起重要影響。

▍試劑盒的開(kāi)發(fā)

• 變量多：抗體對(duì)的配對(duì)、“磁珠”與“酶標(biāo)”的稀釋度、合適的“配方”溶液、其他的試劑盒組分、孵育時(shí)間。

▍檢測(cè)結(jié)果溯源

• 將開(kāi)發(fā)的試劑盒檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照結(jié)果建立相關(guān)的關(guān)系；

• 標(biāo)準(zhǔn)品的穩(wěn)定性是難點(diǎn)；

• 不同的廠家檢測(cè)結(jié)果的絕對(duì)值可能不同。

七、主流的化學(xué)發(fā)光技術(shù)各有千秋

▍化學(xué)發(fā)光基本原理

化學(xué)發(fā)光：由于化學(xué)反應(yīng)（通常是氧化）底物從基態(tài)躍遷為激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)，躍遷能量以光子形式釋放的現(xiàn)象。

▍吖啶酯、ALP以及HRP發(fā)光系統(tǒng)的原理

▍電化學(xué)發(fā)光原理

▍各個(gè)系統(tǒng)優(yōu)劣勢(shì)比較

▍主流的5大發(fā)光技術(shù)各有優(yōu)缺點(diǎn)

• 綜合來(lái)看，主流的5大發(fā)光技術(shù)各有優(yōu)缺點(diǎn)，不能說(shuō)技術(shù)誰(shuí)優(yōu)誰(shuí)劣，但是從市場(chǎng)來(lái)看，Roche的電化學(xué)發(fā)光技術(shù)市場(chǎng)認(rèn)可度稍稍領(lǐng)先；

• 從國(guó)外四大家的優(yōu)勢(shì)項(xiàng)目對(duì)比來(lái)看，Roche（電化學(xué)）在腫瘤項(xiàng)目上占優(yōu)，雅培（吖啶酯）在傳染病項(xiàng)目上占優(yōu)，而丹納赫（ALP）在甲功激素項(xiàng)目上占優(yōu)，也可以看出代表各個(gè)國(guó)外龍頭廠家代表的技術(shù)無(wú)法占據(jù)絕對(duì)優(yōu)勢(shì)；

• 相對(duì)于不同技術(shù)種類的差異，國(guó)內(nèi)廠家對(duì)產(chǎn)品研發(fā)、質(zhì)量控制能力更為重要。

八、如何評(píng)價(jià)廠家產(chǎn)品

▍化學(xué)發(fā)光儀器的性能評(píng)價(jià)與比較：

1、故障率是對(duì)儀器評(píng)價(jià)的核心標(biāo)準(zhǔn)；

2、其他考慮標(biāo)準(zhǔn)：款式、尺寸、測(cè)試速度、試劑位、樣本位等，需要結(jié)合客戶需求，綜合性考慮

▍化學(xué)發(fā)光試劑的性能評(píng)價(jià)與比較：

• 準(zhǔn)確度是評(píng)價(jià)試劑性能的主要指標(biāo)，一切指標(biāo)都體現(xiàn)在測(cè)試是否準(zhǔn)確，但是由于各個(gè)標(biāo)志物均有一定的特異性，客戶無(wú)法根據(jù)某一次結(jié)果的正確與否對(duì)該廠家的產(chǎn)品做出評(píng)價(jià)——化學(xué)發(fā)光的結(jié)果只能作為參考，不能作為金標(biāo)準(zhǔn)；

• 國(guó)內(nèi)廠家結(jié)果的準(zhǔn)確度根據(jù)與國(guó)外廠家的對(duì)比結(jié)果來(lái)判斷，線性系數(shù)R2、顯著性水平等是重要的指標(biāo)；

• 除了準(zhǔn)確度以外，試劑的靈敏度、重復(fù)性、線性范圍、抗干擾能力、存儲(chǔ)穩(wěn)定性、開(kāi)機(jī)穩(wěn)定性、試劑盒的包裝量等20多個(gè)參數(shù)均為試劑盒的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

除了儀器與試劑性能的對(duì)比，裝機(jī)量、單機(jī)使用量、項(xiàng)目總數(shù)量、項(xiàng)目發(fā)布、三甲醫(yī)院使用率等數(shù)據(jù)對(duì)評(píng)價(jià)廠家的產(chǎn)品同樣重要，需要綜合評(píng)價(jià)。