化學(xué)發(fā)光免疫分析法根據(jù)其標(biāo)記物的不同可分為三大類，即直接化學(xué)發(fā)光免疫分析、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析和電化學(xué)發(fā)光免疫分析法。

1. 直接化學(xué)發(fā)光免疫分析

通常由吖啶酯直接標(biāo)記抗體(抗原)，與待測標(biāo)本中相應(yīng)的抗原(抗體)發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體待測抗原吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物，這時只需加入氧化劑( H²O² )和NaOH使成堿性環(huán)境，吖啶酯便可分解、發(fā)光。

2. 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析

從標(biāo)記免疫分析角度，化學(xué)發(fā)光酶免疫分析( CLEIA )，應(yīng)屬酶免疫分析，只是酶反應(yīng)的底物是發(fā)光劑，操作步驟與酶免分析完全相同: 以酶標(biāo)記生物活性物質(zhì)(如酶標(biāo)記的抗原或抗體) 進(jìn)行免疫反應(yīng)，免疫反應(yīng)復(fù)合物上的酶再作用于發(fā)光底物，在信號試劑作用下發(fā)光，用發(fā)光信號測定儀進(jìn)行發(fā)光測定。目前常用的標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶(HRP) 和堿性磷酸酶(ALP)，它們有各自的發(fā)光底物。

（1）辣根過氧化酶--魯米諾( HRP-Luminol )系統(tǒng)

常用的底物為魯米諾，或其衍生物如異魯米諾。先用辣根過氧化物酶( HRP )標(biāo)記抗體(或抗原)，在與反應(yīng)體系中的待測標(biāo)本和固相載體發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體待測抗原-酶( HRP )標(biāo)記抗體復(fù)合物，再加入魯米諾發(fā)光劑、H20，和化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑使產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。

（2）堿性磷酸酶--AMPPD ( ALP-AMPPD )系統(tǒng)

通常以AMPPD作為堿性磷酸酶( ALP )的化學(xué)發(fā)光底物，屬于輝光型發(fā)光，波長為470 nm。在適宜的緩沖液中，隨著酶的催化水解作用，AMPPD分解成AMP-D，后者發(fā)出強(qiáng)度很高的光信號，其發(fā)光的速度取決于堿磷酶的濃度。

3. 電化學(xué)發(fā)光免疫分析

電化學(xué)發(fā)光免疫分析( ECLIA )是以電化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記抗體(抗原)，以三丙胺(TPA)為電子供體在電場中因電子轉(zhuǎn)移而發(fā)生特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)它包括電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個過程。